摘要：本文系统研究了Cy5-PEG-Maleimide（Cy5-PEG-MAL）在蛋白质巯基特异性标记中的应用，重点分析PEG链长对标记效率及生物活性的影响。
一、技术概述
Maleimide（MAL）基团可选择性修饰蛋白质半胱氨酸残基，结合PEG间隔臂（MW 5000）和Cy5荧光团，Cy5-PEG-MAL实现了位点特异性标记，避免传统NHS酯类试剂的非特异反应。
二、标记条件优化
在pH 6.5缓冲液中，Cy5-PEG-MAL与β-乳球蛋白的摩尔比10:1时，标记效率达92%。圆二色谱（CD）显示，标记后蛋白质二级结构保留率超过85%。
三、细胞标记应用
以表皮生长因子受体（EGFR）为模型，Cy5-PEG-MAL标记的抗体在A431细胞中显示特异性膜结合，荧光信号强度与受体表达量呈线性相关（R2=0.94）。
四、技术优势与挑战
相比无PEG修饰的Cy5-MAL，Cy5-PEG-MAL标记产物稳定性提升3倍，但PEG链长超过10 kDa时可能引发空间位阻效应。未来需建立标准化标记流程。
结论
Cy5-PEG-MAL为蛋白质功能研究提供了高效标记工具，其模块化设计可拓展至多种生物分子标记场景。
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