FITC-脂多糖（LPS）|FITC-LPS在脓毒症免疫机制研究中的动态可视化应用

发表时间：2025-03-21

1. 引言
革兰氏阴性菌脂多糖（LPS）是脓毒症的主要致病因子，其通过TLR4受体触发炎症反应的过程仍存在动态机制黑洞。传统研究方法依赖终点检测，无法捕捉受体-配体相互作用的瞬时变化。FITC-LPS可借助其荧光共振能量转移（FRET）特性，实现分子互作的可视化。

2. 技术构建

· 探针设计：采用铜催化叠氮-炔环加成（CuAAC）反应，将FITC定点-于LPS的脂质A疏水末端。

· 细胞模型：构建TLR4-GFP转基因巨噬细胞系，通过全内反射荧光显微镜（TIRFM）观察FITC-LPS与受体结合动力学。

· 动物模型：脓毒症小鼠尾静脉注射探针，结合IVIS光谱成像系统监测LPS在脾脏的微分布。

3. 关键发现

· 受体簇集现象：LPS刺激后TLR4受体形成微米级簇集结构，荧光强度波动周期与NF-κB核转位节律同步（周期≈12min）。

· 组织渗透差异：脾脏红髓区FITC荧光强度是白髓的3.2倍，揭示LPS通过边缘区优先入血的路径。

· 治疗干预响应：厄多司坦预处理使受体簇集尺寸减小40%，荧光寿命延长（τ=2.8→3.5ns），验证黏液调节在脓毒症中的保护作用。

4. 临床启示
该探针为脓毒症免疫麻痹机制提供动态标志物，未来可结合超分辨显微镜解析受体纳米域重组规律。