胰岛素:由51个氨基酸组成的双链多肽(A链21肽,B链30肽),含3对二硫键。
FITC标记:通过异硫氰酸基团(-N=C=S)与胰岛素氨基(-NH?)共价结合,形成绿色荧光复合物(激发/发射波长495/525 nm)。
步骤:
FITC活化:溶解于DMSO或DMF中。
偶联反应:胰岛素与FITC按摩尔比1:5混合,室温避光反应2-4小时。
纯化:凝胶过滤(Sephadex G-25)或HPLC去除游离FITC。
验证:紫外分光光度法(λ=495 nm)定量标记效率(通常5-10个FITC/胰岛素分子)。
受体研究:实时观察胰岛素受体内化及亚细胞定位。
药物递送:构建荧光纳米粒追踪胰岛素跨血脑屏障效率。
病理模型:监测糖尿病模型动物的胰岛素清除率。
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