NHS-PEG10K-CRGDyk活化酯在蛋白质偶联反应中的应用研究

发表时间：2025-04-10

摘要：本文开发了基于NHS-PEG10K-CRGDyk的异双功能交联剂，用于抗体-药物偶联物（ADC）的构建。通过高效液相色谱（HPLC）纯化获得纯度>98%的产物，其N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯基团可与抗体氨基快速反应（pH 8.5，30min），而CRGDyk肽则保留对肿瘤血管的靶向性。细胞实验表明，偶联物对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的粘附率是未修饰抗体的2.7倍，且血浆稳定性延长至72小时。

关键词：NHS活化酯；抗体偶联；CRGDyk；靶向配体；药物递送

1. 引言：概述ADC技术在肿瘤治疗中的优势，提出NHS-PEG-CRGDyk的设计策略。

2. 合成与表征：

1. 合成路线：PEG10K依次与CRGDyk肽（固相合成）和NHS活化酯反应，HPLC-MS验证结构。

2. 反应动力学：紫外分光光度法监测NHS酯与模型蛋白（BSA）的反应速率常数（k=0.82 M?1s?1）。

3. 生物学评价：

1. 靶向性：表面等离子体共振（SPR）分析偶联物与αvβ3整合素的结合常数（Kd=1.2nM）。

2. 药代动力学：小鼠体内成像显示偶联物在肿瘤部位的滞留时间比非靶向对照组延长1.9倍。

4. 结论：NHS-PEG10K-CRGDyk为ADC药物开发提供了模块化偶联平台，平衡了反应活性与靶向特异性。