在近红外荧光成像研究领域，如何在完全不引入有毒重金属催化剂的温和条件下实现快速、特异的生物标记，一直是一个备受关注的技术难题。Sulfo-CY7-DBCO作为一种兼具出色水溶性和超高反应活性的近红外荧光染料，完美地解决了这一关键问题。本文将详细介绍其无铜点击标记的原理和标准操作流程。
一、应变促进的叠氮-炔环加成反应
Sulfo-CY7-DBCO分子结构中引入了二苯并环辛炔基团，该基团由于存在巨大的环张力和独特的分子构型，可以在完全没有铜离子催化的情况下，与生物分子上预先修饰的叠氮基团快速发生点击化学反应。这一反应在生理温度和pH条件下即可顺利进行，反应速度极快，副产物极少，生物兼容性极佳。结合Sulfo-CY7在近红外区域的独特发射特性，该探针非常适合用于活体深层组织的荧光成像研究，因为近红外光在生物组织中的穿透深度大，而且可以有效避开组织自身荧光的干扰。
二、标记方案与优化
进行标记操作时，将Sulfo-CY7-DBCO溶解于磷酸盐缓冲液或二甲基亚砜中，然后与待标记的叠氮修饰蛋白或核酸按照适当的摩尔比例混合，在室温条件下避光孵育30分钟至1小时即可完成标记。反应效率可以通过薄层层析色谱或高效液相色谱进行实时监控。为了避免非特异性吸附带来的背景干扰，建议在反应体系中加入少量的表面活性剂。标记完成后，必须通过脱盐柱或透析袋彻底去除过量的游离染料。
三、成像参数建议
使用小动物活体成像系统进行图像采集时，激发波长推荐设定在740至760纳米范围，发射波长采集窗口设定在780至800纳米范围。尾静脉注射的推荐剂量通常为每只小鼠1至5纳摩尔，最佳的成像时间窗口为注射后1至4小时。
扫码关注
