渝偲分享┃ALC-0315可电离脂质如何构建LNP？实验配方与操作步骤详解

一、分子设计原理

ALC-0315（CAS号2036272-55-4）是一种结构优化的可电离阳离子脂质，分子由疏水多支链烷基、可离子化胺类头基及酯键连接骨架构成，具有典型的两亲性结构。其pKa值约为6.7，在生理pH条件下呈电中性，可减少与血液中蛋白的非特异性结合，延长循环时间；在酸性内体中质子化带正电，促进内体膜融合与内容物释放。独特的长链不饱和结构与精细的分子设计，赋予其高包封效率与低细胞毒性。

二、LNP配方与制备

在脂质纳米颗粒构建中，ALC-0315通常与辅助脂质、胆固醇及聚乙二醇化脂质协同使用。以经典配方为例，各组分摩尔比约为：ALC-0315占46.3%，辅助脂质DSPC占9.4%，胆固醇占42.7%，聚乙二醇化脂质占1.6%。操作时分别称取各脂质，溶解于乙醇配制储备液，涡旋振荡至澄清。将脂质混合物与核酸溶液按特定比例混合，通过微流控芯片快速制备纳米颗粒。

三、操作步骤要点

采用微流控法制备时，总流速建议控制在12毫升每分钟，乙醇脂质相与水相体积比为1比3，温度维持室温。将两相溶液分别注入微流控芯片的双入口，快速混合后收集悬液，室温孵育15分钟。随后透析置换为磷酸盐缓冲液，每2小时换液一次。末段经0.2微米无菌过滤，于4摄氏度保存。若无微流控设备，可采用移液器快速混合法或涡旋混合法替代，上下移液20至30秒后按相同后续步骤处理。

四、质量控制与表征

制备完成后需进行多项表征验证。动态光散射检测粒径，目标值通常控制在80至120纳米。Zeta电位仪检测表面电荷，目标值约为正20至正40毫伏。包封效率可通过荧光素酶报告基因法或Ribogreen染色法测定未包封核酸含量。透射电子显微镜可观察颗粒球形结构及分散性。ALC-0315的酯键结构赋予其良好的代谢特性，在体内通过连续酯水解反应分解，经胆汁和肾脏清除，避免长期蓄积。

ALC-0315（可电离氨基脂质，CAS:2036272-55-4）仅限科研实验使用，不得用于人体相关研究。